Detección de Trypanosoma cruzi en tejido y sangre murina por PCR convencional y en tiempo real / Detection of Trypanosoma cruzi in murine blood and tissue by conventional and real time PCR / Detecção de Trypanosoma cruzi em tecido e sangue murinos por PCR convencional e em tempo real

El objetivo del presente trabajo fue comparar la detección de ADN de Trypanosoma cruzi mediante PCR en tiempo real (qPCR) y PCR convencional en sangre periférica (n=25) y músculo esquelético (n=20) de ratones tratados con drogas tripanomicidas luego de 6 meses post-tratamiento. En las muestras de sangre se detectaron un total de 7 positivas por qPCR, mientras que por PCR convencional sólo se detectaron 2. En músculo esquelético, 15 muestras fueron positivas por qPCR y 3 por PCR convencional. Los resultados obtenidos demuestran que la fuerza de concordancia es débil entre las técnicas de PCR utilizadas para la detección de ADN de T. cruzi (k=0,37; 49% positivas por qPCR vs. 11% por PCR convencional, p=0,0001). En las muestras de sangre, los valores diagnósticos de qPCR con respecto a la PCR convencional fueron: 100% sensibilidad; 78% especificidad; 30% VPP; 100% VPN; 4,6 RVP; 0 RVN. Para las muestras de músculo esquelético se obtuvieron los siguientes valores diagnósticos de qPCR: 100% sensibilidad; 29% especificidad; 20% VPP; 100% VPN; 1,4 RVP; 0 RVN. Ambas técnicas fueron igualmente sensibles en el rango de mediana-alta concentración, pero qPCR fue más efectiva para detectar bajas cargas parasitarias, en particular en las muestras de tejido.

The aim of this work was to compare detection of Trypanosoma cruzi DNA by real time (qPCR) and conventional PCR in peripheral blood (n=25), and skeletal muscle (n=20) of mice treated with trypanocidal compounds after 6 months post-treatment. A total of 7 blood samples were positive by qPCR; whereas, by conventional PCR only 2 were detected. In skeletal muscle, 15 samples were regarded positive by qPCR and 3 by conventional PCR. These results showed a weak concordance strength among PCR techniques employed to detect T. cruzi DNA in the studied samples (k=0.37; 49% positives by qPCR vs. 11% by conventional PCR, p=0.0001). In blood samples, qPCR diagnostic values in comparison with conventional PCR were: 100% sensibility; 78% specificity; 30% PPV; 100% NPV; 4.6 PVR; 0 NVR. For skeletal muscle samples, qPCR diagnostic values were: 100% sensibility; 29% specificity; 20% PPV; 100% NPV; 1.4 PVR; 0 NVR. Both techniques were equally sensitive in the medium-high concentration range, but qPCR was more effective to detect low parasitic burden, particularly in skeletal muscle samples.

O objetivo deste estudo foi comparar a detecção de DNA de Trypanosoma cruzi por PCR em tempo real (qPCR) e PCR convencional no sangue periférico (N=25) e músculo esquelético (N= 20) de camundongos tratados com medicamentos tripanomicidas depois de 6 meses de pós-tratamento. Nas amostras de sangue foi detectado um total de sete positivas por qPCR; enquanto que apenas foram encontradas 2 por PCR convencional. No músculo esquelético, 15 amostras foram positivas por qPCR e 3 por PCR convencional. Os resultados mostram que a força de concordância é fraca entre as técnicas de PCR utilizadas para a detecção de DNA de T. cruzi (k=0,37, 49% positivas por qPCR vs. 11% para a PCR convencional, p=0,0001). Nas amostras de sangue, os valores diagnósticos de qPCR em relação a PCR convencional foram de 100% sensibilidade; 78% de especificidade; 30% de VPP; 100% VPN; 4,6 RVP; 0 RVN. Para as amostras de músculo esquelético, os seguintes valores diagnósticos de qPCR foram obtidos: 100% sensibilidade; 29% de especificidade; 20% de VPP; 100% VPN; 1,4 RVP; 0 RVN. Ambas as técnicas são igualmente sensíveis na faixa de concentração média-alta, mas qPCR foi mais eficaz na detecção de baixas cargas parasitárias, especialmente em amostras de tecido.

Immunological correlates of cure in the first American Cutaneous Leishmaniasis patient treated by immunotherapy in Argentina: A case report. / Correlatos inmunológicos de curación en el primer paciente con Leishmaniasis Cutánea Americana tratado con inmunoterapia en Argentina: Reporte de un caso

A patient with localized cutaneous leishmaniasis due to Leishmania (Leishmania) amazonensis infection was treated with an antigen containing heat-killed L. (L.) amazonensis promastigotes plus BCG. Expression of T-cell differentiation, memory and senescence receptors markers were analyzed on T cell subpopulations, in order to establish the correlation between the percentages of expression of these receptors and his clinical status, at different stages of his follow up. The following case reports on the achievement of a successful clinical outcome with complete resolution after receiving immunotherapy. A thorough clinical and immunological follow up supporting the healing process of this patient’s lesion is presented in detail.

Un paciente con leishmaniasis cutánea localizada producida por Leishmania (Leishmania) amazonensis fue tratado con un antígeno compuesto por promastigotes de L. (L.) amazonensis muertos por calor combinado con BCG. Se analizó la expresión de distintos receptores de diferenciación, de memoria y de senescencia en las subpoblaciones de células T, con el fin de establecer una relación entre los porcentajes de expresión de dichos receptores y la clínica del paciente en diferentes momentos del seguimiento. Se reporta en este caso un resultado exitoso, con resolución completa de la lesión después de recibir la inmunoterapia, y se presenta en detalle un seguimiento clínico e inmunológico completo durante el proceso de curación.

Protective immunity against Trypanosoma cruzi

Upon infection, Trypanosoma cruzi triggers a strong immune response that has both protective and pathological consequences. In this work, several important questions regarding protective immunity are reviewed. Emphasis is placed on recent studies of the important protective role of CD8+ T cells and on previous studies of immunisation of domestic T. cruzi reservoirs that sought to address practical vaccination problems. Research on the maturation of memory cells and studies indicating that the prevalence of T. cruzi-specific T-cell responses and a high frequency of committed CD8+ T cells are associated with better clinical outcomes are also reviewed. Additionally, animal models in which protection was achieved without immunopathological consequences are discussed.

Susceptibilidad de distintas cepas de ratones a la infección por Leishmania amazonensis / Susceptibility of different mouse strains to Leishmania amazonensis infection

Antecedentes. En el modelo murino más estudiado, producido por L, major, se observa correlación entre cepas resistentes (C57BL6) y susceptibles (BALB/c), con respuestas inmunes Th1 o Th2, respectivamente. Esta dicotomía no se observa en modelos desarrollados con otras especies de Leishmania (L). Por ello es importante avanzar en el estudio de modelos experimentales con especies predominantes de nuestra zona. El objetivo fue reproducir la enfermedad en diferentes cepas murinas luego de la infección por L. amazonensis. Métodos. Para conocer el efecto de la variable cepa de ratones sobre la susceptibilidad a la infección por L. amazonensis, se aplicó un inóculo constante del parásito a las cepas en estudio. Se evaluó la respuesta de las cepas C57BL/6, BALB/c y Swiss, por medición de lesiones, estimación de carga parasitaria e histopatología. Por ELISA se determinaron anticuerpos y citoquinas en suero. Test estadístico: análisis de la varianza (ANOVA). Resultados. BALB/c demostró máxima susceptibilidad a la infección; Swiss presentó un fenotipo intermedio, y C57BL/6 fue la menos susceptible. Se obtuvieron modelos murinos que reprodujeron distintas formas clínicas comparables a la enfermedad humana. Conclusiones. Los resultados servirán para extrapolar a la patología humana las conclusiones de posteriores ensayos terapéuticos y profilácticos sobre animales experimentales.

Background.Most studies have been based onL. majormouse mo-dels, where Th1 and Th2 immune responses are associated with resistant(C57BL/6) and susceptible (BALB/c) strains, respectively. This dichotomyis not generally observed in models developed with otherLeishmania (L.)species. Therefore, the study of mouse models involving species respon-sible for human infections in our region represents an important challen-ge. The aim was to induce the disease in diff erent mouse strains after theinfection withL. amazonensis.Methods.To study the eff ect of “mice strain” variable over “susceptibilityforL. amazonensisinfection”, a constant parasite inoculum was appliedto the studied mice strains. Response to infection was characterized inC57BL/6, BALB/c, and Swiss strains by lesion measurement, parasitic loadestimate and histological analysis. Serum presence of antibodies andcytokines was determinated by ELISA. Statistical analysis: ANOVA test.Results.BALB/c showed the maximum level of susceptibility towardsthe infection. Swiss demonstrated an intermediate phenotype andC57BL/6 was the most resistant strain. We could obtain murine modelsrefl ecting diff erent clinical forms present in human disease.Conclusions.These results will be useful to extrapolate to human pa-thology future conclusions about therapeutic and prophylaxis analysison experimental models (Dermatol Argent 2009;15(5):334-339)

Use of the polymerase chain reaction (PCR) for early evaluation of etiological treatment in young adults, chronically infected with Trypanosoma cruzi

Foi realizado o tratamento etiológico com benznidazol, no Estado de Salta, Argentina, em 14 pacientes infectados crônicos por Trypanosoma cruzi, de 18 a 30 anos de idade, com Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) positiva. Um grupo controle de cinco pacientes, da mesma idade, também com PCR positiva, não recebeu tratamento. O seguimento após tratamento foi realizado com PCR e sorologia convencional. Após 6 meses de tratamento foi observada negativização da PCR de 14/16 (85,7por cento) nos pacientes tratados versus 20por cento no grupo controle (p=0,001). A sorologia foi positiva em todos os pacientes depois do tratamento. Os resultados da PCR pós-tratamento, podem ser um indício de cura no tratamento de infectados chagásicos crônicos, adultos jovens.

Force of infection and evolution of lesions of canine tegumentary leishmaniasis in Northwestern Argentina

A clinical-serological follow-up was carried out in a canine population in endemic foci of Leishmania braziliensis spread in northwestern Argentina. Each dog was studied in at least two visits, 309 + or - 15 days (X + or - SE) apart. Some initially healthy dogs (n=52) developed seroconversion or lesions. The clinical evolution of the disease in dogs resembles in many aspects the human disease. Similarities include the long duration of most ulcers with occasional healing or appearance of new ones and the late appearance of erosive snout lesions in some animals. Yearly incidence rates of 22.7 percent for seroconversion and of 13.5 percent for disease were calculated as indicators of the force of infection by this parasite upon the canine population

Studies on the virulence and attenuation of Trypanosoma cruzi using immunodeficient animals

Tissue invasion and pathology by Trypanosoma cruzi result from an interaction between parasite virulence and host immunity. Successive in vivo generations of the parasite select populations with increasing ability to invade the host. Conversely, prolonged in vitro selection of the parasite produces attenuated sublines with low infectivity for mammals. One such subline (TCC clone) has been extensively used in our laboratory as experimental vaccine and tested in comparative experiments with its virulent ancestor (TUL). The experiments here reviewed aimed at the use of immunodeficient mice for testing the infectivity of TCC parasites. It has not been possible to obtain virulent, revertant sublines by prolonged passaged in such mice

La transmision de la enfermedad de Chagas en Salta y la deteccion de casos congenitos / The transmission de Chagas disease in Salta and the detection of congenital cases

Se presenta una revisión y actualización de datos sobre las tasas de seroprevalencia para el Trypanosoma cruzi en la Provincia de Salta en las tres últimas décadas, con especial referencia a la detección de casos congénitos y a los beneficios económicos de prevenir la enfermedad de Chagas. Los datos seroepidemiológicos obtenidos en conscriptos de 20 años de edad revelaron una disminución de la seroprevalencia, del 22.7 al 11.1 por ciento entre 1965 y 1985. En estudiantes universitarios, las cifras actuales son más bajas (0.96 por ciento). Las encuestas realizadas en 1996 revelaron seropositividad en más de 15 por ciento de las embarazadas analizadas, sobre todo en la zona Norte de la provincia. Esta situación trae aparejado un alto riesgo de aparición de casos congénitos de infección y, a la vez, una oportunidad para el ensayo de estrategias más adecuadas para su detección. Mediante la aplicación sistemática de Microstrout, Hemocultivo y PCR, se está logrando aumentar la detección temprana de niños con infección congénita. En aborígenes del Chaco salteño encontramos en 1992-94 tasas globales de seroprevalencia del 37 por ciento, con 5 localidades de altísima transmisión, en las que se observó más de un 54 por ciento de infectados. Estas cifras indican que, en vastas zonas del territorio provincial, la lucha contra la vinchuca no sólo debe reducirse a acciones de vigilancia, sino de renovado ataque y nuevas inversiones en rociado, control de bancos de sangre y control de embarazadas para prevenir la transmisión congénita. Un análisis realizado del rédito económico de las operaciones de rociado, sólo para el Departamento de Anta, arroja un valor actual neto que supera los 7 millones de dólares, con tasas internas de retorno de más de 60 por ciento.

Telómeros y telomerasas en envejecimiento celular y cáncer / Telomeres and telomerases in celular aging and cancer

La importancia que tienen los Telómeros y las Telomerasas en el control de la reproducción celular, se ha manifestado en una serie de investigaciones de los últimos 10 años. El cuerpo de conocimientos generados resulta sorprendente, cuando se considera que en ese breve tiempo han convergido estudios de disciplinas aparentemente dispares como biología celular en ciliados, replicación de DNA y oncología experimental, para definir una nueva función celular que parece ser fundamental.

Prevention of electrocardiographic and histopathologic alterations in the murine model of Chagas' disease by preinoculation of an attenuated Trypanosoma cruzi strain

Os efeitos da infecçäo do Trypanosoma cruzi nos traçados eletrocardiográficos de camundongos forma estudados em quatro grupos de animais: 1. normal; 2. infectado com cepa patogênica de T. cruzi (TS, COB); 3. imunizados com três inoculaçöes intra-peritoneais de 10**6 epimastigotas de T. cruzi atenuadas (TCC) e 4. imunizados e infectados, que receberam seqüencialmente os tratamentos dos grupos 3 e 2. A infecçäo e proteçäo foram confirmadas por xenodiagnóstico e histopatologia. Alteraçöes isoladas tais como extrassistolia, bloqueio dse primeiro grau átrio-ventricular, aritmia e elevaçäo do ST foram observados tanto em camundongos normais como infectados. Entretanto, os traçados tomados de maneira repetida em camundongo durante um período de 293 dias revelaram conjunto de alteraçöes que foram vistas mais freqüentemente em animais infectados (14/22) que nos normais (4/27) (p=0.00048). Estas alteraçöes consistiram de taquicardia supra-ventricular, bradicardia sinusal e bloqueios de primeiro grau AV, persistentes, freqüentemente associadas a alteraçöes do "pacemaker". A inoculaçäo da cepa atenuada de T. cruzi (grupo 3) näo aumentou estas alteraçöes (2/27) mas preveniu de maneira significante o seu desenvolvimento após o desafio com a cepa patogênica (1/19 versus 14/22 camundongos, p = 0.000095). Portanto, a pré-imunizaçäo reduziu näo somente a parasitemia mas a conseqüência patogênica da infeccäo pelo T. cruzi. Esta evidência é relevante nos estudos de imunoprevençäo em doença de Chagas